Il combat essentiellement des criminels ou des gangsters.
À commencer par le Joker, clown cruel et sadique qui devient véritablement l'ennemi numéro un de Batman ou encore Double-Face dont la véritable identité est Harvey Dent, ami de Wayne et procureur incorruptible.
Défiguré lors d'un procès, Dent sombre dans la folie et décide de faire justice lui-même.
D'autres super-vilains font leur apparition à Gotham City comme le Pingouin, le Sphinx, le Chapelier fou, l'Épouvantail, Hugo Strange, Gueule d'argile ou encore Catwoman avec qui le chevalier noir entretient une relation ambigüe.
Face au nombre croissant d'ennemis, Batman est heureusement rejoint par un partenaire pour l'épauler : Robin.
